应用自家组织苗的改良途径

核心提示：蓝耳病和圆环病毒是猪场常见且最难对付的两种疾病。由于目前国内市场上还没有针对这两种疾病具有明确免疫效果的疫苗供应，因此，自制组织疫苗作为预防这两种疾病的无奈选择，正在全国大大小小的猪场广泛使用。

2002年，自制组织疫苗首次在猪场推广使用时，确实取得了显著成效，对有效预防猪场PRRS和圆环病毒发挥了巨大作用。不少濒临破产的养猪场已经重振旗鼓。但问题是：很多人过分夸大自家组织苗的作用，有的猪场管理人员和技术人员甚至迷信自家组织苗。一位养猪场经理曾介绍过自己养猪的经验，他说自己基本上不用管其他工作，只要监督自己组苗的生产，就可以让自己养猪场的病猪根本看不到肺部病毒性病变。并且仍然坚持收集病猪的肺来制作自己的组织疫苗。目前，不少养猪技术人员对自家组织苗至少存在以下两个误区：

(1)自制组苗可长期使用。自制组织疫苗的效果取决于病变组织中的病毒含量。 2002年自制组织疫苗首次推广使用时，由于猪场以前没有使用过有效疫苗，病猪症状比较典型，病组织病毒含量高，每批采集的病材中病毒含量变异程度不大，故自制组苗效果显着且稳定。然而，随着疫情逐渐得到控制，典型的病害材料越来越难获取。采集自然病猪的病组织自制组织苗，效果会越来越差。这是使用自制组织苗的必然规律。事实证明，很多猪场使用自家组织苗一段时间后，效果越来越差。不仅PRRS或圆环病毒仍然存在，其他疾病也越来越难以控制。因此，自制组织苗只能是临时应急措施，不能长期使用。长期使用自制组苗会给猪场带来一系列的风险，我们将在本文的风险评估部分进行探讨。

(2)自生苗，包治百病。很多技术人员认为，只要猪场有疾病，自制的组织疫苗就会含有相应的抗原。因此，使用本场病猪患病组织制成的自制组织疫苗，可预防猪场一切疾病。这种认识是非常错误的。作为疫苗，要使其对特定的传染病具有免疫力，必须满足两个条件：1）疫苗必须含有相应的免疫原性抗原； (2)抗原的剂量必须符合一定的要求。抗原量太少，不能有效产生抗体；另外，如果抗原量过多或过少，都可能诱发免疫耐受。自制组织疫苗通常是从病猪身上采集病材制成的。然而，各种病原体对组织有不同的偏好。 PRRS 病毒在肺部更为丰富，而经典猪瘟病毒因其趋向性而存在于内皮细胞中。它的特性使其在肾脏和免疫器官中含量更高。如果把所有病猪的内脏都捣碎在一起做疫苗，所有的抗原都会被稀释，很难达到有效免疫的抗原量。所以，我们自己做组织疫苗的时候，都是有针对性的。无论疫苗用来预防什么疾病，我们都应该选择致病成分最多的器官或组织来制作疫苗。因此，自制组织苗不是包治百病的灵丹妙药，不仅不能长期使用，更不能滥用。在使用自己的组织苗之前，一定要认真进行风险评估，然后在权衡利弊的基础上做出科学的决定。

一、风险评估应用自制组织苗的风险主要来自以下两个方面：

1.1 免疫效果不准确的风险。因为我们无法准确定量分析患病组织中的抗原含量，同时，自然病猪各患病组织中病原体的含量差异很大。因此，用自然发生的猪的患病组织制成的自制组织疫苗的免疫效果存在很大的不确定性。一方面，我们无法判断这种疫苗是否能产生有效的保护作用。另一方面，有可能这批疫苗能产生有效保护，下一批却不能产生有效保护。

1.2 疫苗不完全灭活的风险。患有自然病的猪，在体质和抵抗力下降后，容易继发或并发疾病。因此，自然患病猪的患病组织大多含有多种病原体。这些病原体对灭活条件的要求非常不同。以甲醛溶液为例，需氧菌灭活所需浓度为0.1-0.2%，厌氧菌灭活所需浓度为0.4-0.5%，病毒灭活所需浓度为0.05-0.4%。用甲醛溶液灭活病毒的效果并不理想。因此，不同的疫苗需要不同种类和浓度的灭活剂。品种选择不合理，达不到灭活效果。浓度太低，灭活不彻底；浓度过高会破坏抗原的免疫原性，使免疫效果变差。现在很多猪场使用0.3-0.4%的甲醛溶液自制组织苗（有的猪场甚至使用0.3-0.4%的福尔马林，甲醛含量只相当于0.1-0.15%）。方法，不能保证疫苗中的所有病原体都会被灭活。尤其是采用病组织育苗的方法，病组织过滤不彻底，疫苗中含有大量组织破碎后形成的有机物，灭活不完全的问题更为普遍。疫苗灭活不完全会给猪场带来以下两大风险：

1.2.1 引起猪场内疾病传播。疫苗中一定量未灭活的细菌或病毒可能会导致这些疾病在猪场传播，而这种流行是人工感染后的流行，病源致病性强于自然感染。

更难以控制。在目前应用自家组织苗的猪场中，已知最起码有一种疾病是由于使用灭活不彻底的自家组织苗而传播的。猪副嗜血杆菌作为一种兼性厌氧菌，对使用福尔马林灭活的浓度要求很高，虽然目前仍无法获得在使用病料组织制作自家苗(疫苗中含有较多组织物质，灭活浓度肯定要比细菌分离培养制苗时浓度要高)情况下，使猪副嗜血杆菌灭活所需甲醛含浓度的准确数据，但我场曾经做过自家组织苗的攻毒试验，使用经过0.4%甲醛溶液灭活的自家组织苗和未经甲醛灭活，但经过杀菌处理(每1000ml加入阿莫西林500mg+氟苯尼考250mg)过的自家组织苗，分别对健康猪作大剂量攻毒试验(每头猪分左右颈部肌肉注射20ml)，都曾经成功地诱导出典型的猪副嗜血杆菌症状。

 

      1.2.2免疫耐受的风险。低剂量的病毒感染，是免疫耐受的重要诱因。前面我们已经分析过，猪瘟病毒使用甲醛溶液灭活，无法实现彻底灭活的目的。如果用于制作自家组织苗的病料中含有少量猪瘟病毒，这些病毒含量低至不足以引起猪瘟流行，但却可能诱导猪群产生猪瘟免疫耐受，使猪瘟在猪场呈非典型和散发流行。目前，很多猪场猪瘟免疫效果都比较差，是疫苗质量问题？免疫操作问题?还是由于使用灭活不彻底的自家组织苗所带来的猪瘟免疫耐受问题？值得我们进一步探讨。

 

      2、科学决策

 

      正因为自家组织苗存在上述系列的风险，所以，对于猪场是否应该使用自家组织苗，应持非常慎重的态度，并坚持以下三条原则：

 

      2.1细菌性疾病不要使用自家组织苗。通过细菌分离培养的办法制作自价苗，不但成本低，而且可以克服自家组织苗的所有缺点，所以，对于细菌性疾病，完全没有必要采用采集病猪病变组织制作自家苗这种方法。

 

      2.2对于病毒性疾病，如果市场有正规的，且免疫效果确切的疫苗供应，就不应该选择使用自家组织苗。猪瘟，伪狂犬等烈性病毒性疾病，当前国内市场上都有免疫效果确切的疫苗供应，只要猪场从正规渠道选购，并规范免疫操作，一般都不会出现这些方面的问题。目前国内市场上尚没有正规的疫苗供应，或者虽然已有正规的疫苗供应，但免疫效果尚存在争议的病毒性疾病，仅限于蓝耳病和圆环病毒，而且这两种疾病又是猪场最难以对付的疾病，所以，自家组织苗的使用，大都仅限于针对这两种疾病的预防。

 

      2.3只有确证蓝耳病或圆环病毒在猪场致病的情况下，才可考虑使用自家组织苗。蓝耳病和圆环病毒虽然在猪场广泛存在，但并不是在所有猪场都致病，很多猪场其实仅仅是猪群健康带毒。那些自称蓝耳病或圆环病毒正在流行的猪场，可能并不真正是蓝耳病或圆环病毒。可以肯定的是，曾经很多人都认为是蓝耳病的一些症状(如毛毛猪，耳朵发绀等)，其实是由猪副嗜血杆菌所引起的。

 

      判断猪场是否需要制作自家组织苗的依据，不是猪场是否存在蓝耳病或圆环病毒病原，而是这些病原是否在猪场致病。确证蓝耳病或圆环病毒在猪场是否致病，最直接和最有效的办法，就是兽医学上常用的人工攻毒方法。按本文第3节所述的攻毒步骤，对健康猪进行攻毒试验，并认真观察攻毒猪的症状，如果经过7～10天后，攻毒猪出现蓝耳病或圆环病毒症状，说明这些病原在猪场确实致病，需要制作自家组织苗。否则，说明通过严格的饲养管理，猪场完全可以控制这两种疾病，不需要制作自家苗。

 

      3、制苗作方法潜在的改良途径

 

      理论上，现行自家组织苗存在的这些缺点，是可以利用兽医学的方法进行改进的。改进的方法，就是人工攻毒提纯病料，具体步骤如下：

 

      3.1攻毒猪的选取：选择健康，且经过2次以上猪瘟，口蹄疫，伪狂犬，流感等重要烈性传染病免疫的小猪或中猪2～3头，严格隔离饲养，栏舍每天消毒，饲料中添加药物预防细菌性疾病。

 

      3.2攻毒病料的选择和制备：选择蓝耳病或圆环病毒症状典型的病猪一头，摘取病猪的肺，脾和淋巴结，除去结缔组织和病变不典型部分，按照制作自家组织苗的步骤，并按每300g病料制苗1000ml的比例，对病料进行捣碎，过滤和稀释(有必要说明的是，很多猪场在制作自家组织苗时，都忽视了一个细节：捣碎机高速运转，温度上升很快，夏天温度高时，容器中的病料很容易超过40℃，使蛋白质发生变性，破坏病原的免疫原性。故夏天制苗时，病料，加入捣碎机中的生理盐水和用于水浴冷却病料的冷水，都应预先在冰箱中经冷冻过)，稀释后的病料悬浮液不经甲醛灭活，而是每1000ml加入氟苯尼考250mg+阿奇霉素250mg(应该注意的是：阿奇霉素禁止在兽医临床上应用)，充分搅拌均匀，放入37oC恒温箱中杀菌24小时，再放入冰箱中冷藏备用。

 

      3.3攻毒：攻毒猪隔离饲养7天后，观察无异常，即可进行攻毒。取3.2制备的攻毒病料，每头待攻毒猪分左右两侧颈肌注射攻毒病料各10ml(即每头猪20ml)。

 

      3.4攻毒病料的提取：已攻毒猪再经隔离饲养7～10天后，开始出现症状，此时即可解剖病猪提取病料。正常情况下，从攻毒猪提取的病料，比自然感染猪的病变更典型。特别是在从攻毒猪提取病料进行再攻毒后，第2代和以后各代提取的病料，病变将更加典型，基本上都是理想的制作自家苗材料，而且每头猪的病料基本都保持一致。

 

      通过人工攻毒方法产生的病料，由于攻毒剂量比自然感染时大，每头猪的攻毒剂量又基本相当，故病猪发病典型，抗原量较多，而且每头猪病料中抗原含量变异度小，其免疫效价和稳定性必然大大超过自然发病猪的病料。同时，攻毒猪都经过其他疾病的严格免疫，所提取的病料比自然发病猪更纯净，避免了污染其他病原而造成疾病扩散和免疫耐受的风险。虽然要以健康猪作代价，但一头猪的病料可制作1000ml以上的自家苗，保护300头以上小猪，经济上还是比较合算的。

 

      理论上，由于攻毒病料是从本场的病猪提取，并没有外来的传染源，只要对攻毒猪严格隔离饲养和消毒，一般不存在病原扩散的问题。

 

      当然，这种自家组织苗的制作方法，在生产实践中是否会造成病原扩散，仍有待有关专家进一步论证和检验。生产场要推广应用这种方法，必须严格执行国家有关兽医防疫的法律和法规，得到有关兽医防疫和和食品安全部门的许可。